我们用一定剂量的红景天素(一种精制的红景天提取物)加入细胞培养液中培养S-细胞,观察红景天素对S-细胞生长繁殖的抑制作用,现报告如下:

一、实验材料

1、红景天素:北京红景天技术开发有限公司提供红景天,由本校化学教研室提取分离。

2、S-细胞:本校预防医学院放射生物室提供。

3、RPMI培养液:GIKOO美国。

二、实验方法

1、S-细胞体外培养:S-细胞为悬浮生长细胞,传代时用吹管轻吹打几次,使细胞混悬均匀,加适量含10%的小牛血清的培养液,分瓶或分板置于37°C5%CO2培养。

2、最小毒性剂量测定:在观察红景天素对肿瘤细胞有否抑制作用之前,找出红景天素对非肿瘤细胞有毒性作用的最小毒性剂量。将不同剂量的红景天素加入营养液中培养人胚肺二倍体细胞(终浓度为每毫升营养液含5、10、20、30和40μg),光镜下逐日观察细胞生长情况,并用中性红染料摄入实验测定活细胞数,找出最小毒性剂量。

3、实验分组:设三个实验组,分别含红景天5、10和20μg/ml,并设不加药组为对照组,在37°C、5%CO2条件下培养48小时后,进行中性红染料摄入实验测定活细胞数。

4、中性红染料摄入实验:根据活细胞能吸收中性红染料,而死细胞不能吸收中性红染料的原理,通过测定各组细胞光密度值的大小间接反映活细胞数的多少,测定时,实验组和对照组细胞分别用生理盐水洗1次,加人中性红染料(终浓度为1:),37℃温育1小时,弃去中性红液,用生理盐水洗3次,加入脱色液(0.1M-NaH2P04和95%

的酒精混合液)室温放10分钟,在nm下测定光密度值(OD值)。

三、结果

1、最小毒性剂量测定结果:加药后24小时光镜下观察人胚肺二倍体细胞,5、10及20ug/mI组细胞生长良好,与对照组无差别。

2、中性红染料摄入实验测定各组细胞的光密度值:实验组与对照组均各设9个复孔,测定结果见下表:

四、讨论

本实验采用体外细胞培养技术,以中性红染料摄入为指征,观察不同剂量红景天素对S-(小鼠腹水瘤)细胞生长的影响。实验结果表明,红景天素对S-细胞确有一定的抑制作用,而这种作用与施用的剂量有关。随浓度增大而抑制作用增强,反之当浓度减至5μg/ml时,几乎无抑制作用。

本实验剂量在肺二倍体细胞最低毒性剂量范围内,同样剂量对非瘤细胞不具有毒性作用。从而表明红景天素对瘤细胞具有相对选择性作用。国内学者早在八十年代就提出了以红景天为中心的环境适应药物的研究将为神经系统、心血管系统、肿瘤防治等提供一类新型药物的设想,本实验进一步证实了这一观点。

白求恩医科大学应用基础医学研究所

王秀清李静波张洪源

白求恩医科大学三院

王宪富

——引自《吉林中医药》

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长按







































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